RFLP și aplicațiile de analiză a ADN-ului

Lungimea fragmentului de restricție Polimorfismul (RFLP) este o metodă moleculară de analiză genetică care permite identificarea indivizilor pe baza unor modele unice de tăiere a enzimelor de restricție în anumite regiuni ale ADN-ului.

De asemenea, cunoscută sub numele de Analiza RFLP, tehnica folosește polimorfismele din codurile genetice individuale ale oamenilor. Chiar dacă toți membrii unei specii au în esență același machiaj genetic, aceste diferențe ușoare reprezintă variații ale fenotipului, cum ar fi aspectul sau metabolismul, între indivizi.

RFLP: tehnica de analiză și aplicații

Tehnica de analiză RFLP implică tăierea unei anumite regiuni a ADN-ului cu variabilitate cunoscută, cu enzime de restricție, apoi separarea fragmentelor de ADN prin electroforeză pe gel de agaroză și determinarea numărului de fragmente și mărimi relative.

O enzimă de restricție este o enzimă, o moleculă de proteină, care taie ADN-ul la situsurile de restricție. În esență, proba ADN este ruptă și digerată de enzimele de restricție. Fragmentele rezultate sunt separate în funcție de lungimile lor, iar modelul dimensiunilor fragmentului va fi diferit pentru fiecare persoană testată.

Procesul RFLP complet necesită etichetarea probelor, fragmentarea ADN-ului, electroforeza, blotting-ul, hibridizarea, spălarea și autoradiografia. RFLP detectat este vizualizat folosind filmul cu raze X într-o autoradiografie, unde fragmentele de ADN pot fi văzute și analizate după ce sunt separate de ele prin electroforeză.

Unele dintre aplicațiile pentru analiza RFLP includ:

• Densitatea amprentelor ADN. Oamenii de stiinta de la forensic pot folosi analiza RFLP pentru a identifica suspectii pe baza probelor de dovezi colectate la scene de crime.
• Paternitate. RFLP este, de asemenea, utilizat în determinarea paternității sau pentru trasarea strămoșilor.
• Diversitate genetică. Tehnica poate fi utilizată în studierea evoluției și migrației faunei sălbatice, studierea modelelor de reproducere în populațiile de animale și detectarea și diagnosticarea anumitor boli.

Tehnica utilizării detecției RFLP a variațiilor genomului este un instrument vital în cartografia genomului și analiza genetică a bolilor. Dacă locația unei anumite gene de boală este căutată într-un anumit cromozom, atunci cercetătorii ar analiza ADN-ul membrilor unei familii cu boala, apoi căutați modele similare de moștenire în alelele RFLP.

Odată ce o gena a bolii este localizată, efectuarea analizei RFLP pe alți membri ai familiei ar putea dezvălui un purtător al genelor mutante sau semnalul riscului global al bolii. Este important de remarcat faptul că tehnica RFLP nu este folosită pe scară largă acum, că tehnicile mai noi, mai robuste sunt folosite pentru analiza ADN în știința criminalistică și în alte domenii.

Aspecte negative

Din păcate, tehnica de analiză RFLP este obositoare și lentă. În afară de necesitatea unei cantități mari de probe de ADN - eșantionul ar trebui să aibă, de obicei, dimensiunea unui sfert, relativ mare pentru probele de ADN - procesul, de la etichetarea probelor la spălare și autoradiografie, poate dura până la luna completa pentru a finaliza.

Rezultatele din Proiectul Genomului uman au înlocuit destul de mult necesitatea pentru RFLP. Proiectul a permis determinarea întregii secvențe a ADN-ului găsit în celulele umane, genomul uman și pentru identificarea tuturor genelor din genomul uman.